倍受七彩神仙爱好者们关注的一个普遍问题是如何分辨雌雄。七彩的雌雄辨别相对于其他观赏鱼比较困难，因其性征表现不明显。但到了性成熟后还是可以分辨的。
下表是七彩神仙雌雄生殖道对照表：

雌雄生殖道的区别

雄性 雌性
短 长
圆形 水滴形状
三角形 粗大

雄性七彩神仙的腹部视图

雌性七彩神仙的腹部视图
除此之外，性别的区分还可以根据以下特征区别：

雄性七彩神仙体形较大，上下鳍端形成尖角，生殖孔不突出，体色没有雌性鲜明。

雌性七彩神仙体形较小，上下鳍端较圆钝，生殖孔突出，体色较鲜明。